Totally Spies kể về ba thiếu nữ thám tử trẻ tuổi là Sam, Clover và Alex, đều là những điệp viên vô cực. Mỗi người đều có tính cách riêng biệt nhưng họ hợp tác tuyệt vời trong các nhiệm vụ. Nhiệm vụ của họ là bắt các tên tội phạm quốc tế nguy hiểm dưới sự chỉ đạo của ông Jerry, người đứng đầu WOOHP - Tổ chức Quốc tế Bảo vệ Con người. Jerry là người nghiêm khắc nhưng cũng giấu mẹ rằng ông là sếp của WOOHP, và nói rằng ông là chủ khách sạn. Mẹ của ba cô điệp viên biết về công việc bí mật của con mình và đã mua cho họ một ngôi nhà gần trường. Bên cạnh đó, Sam, Clover và Alex cũng trải qua cuộc sống học đường, tình bạn và tình yêu như bất kỳ cô gái nào khác.
